Подбор оптимальных условий постановки ПЦР для идентификации возбудителя бруцеллеза собак

Аннотация

Бруцеллез собак – зоонозное заболевание, оказывающее негативное влияние на репродуктивную систему данных животных и, как следствие, приводящее к значительным экономическим потерям питомников. Заболевание представляет опасность и для здоровья человека, особенно для ветеринарных работников и заводчиков. Диагностические исследования при бруцеллезе в большинстве своем основаны на серологических и фенотипических методах, являющихся достаточно трудоемкими и обладающих низкой специфичностью. Наиболее совершенными являются молекулярно-генетические подходы, в частности, разновидности метода ПЦР, основу которого составляет биоинформационный анализ. В рамках данной работы проанализированы полногеномные последовательности геномов бруцелл, представленных в базе данных GenBank. По результатам проведенного анализа подобраны локусы, одни из которых имеются лишь у представителей видов B. canis, другие – у В. abortus, третьи – у B. melitensis. На основе выбранных ДНК-маркеров сконструированы праймеры и TagMan-зонды, позволяющие выявлять и проводить дифференциацию видов возбудителя бруцеллеза. Также подобран оптимальный состав реакционной смеси и определены единые условия амплификации, позволяющие проводить ПЦР в условиях одной реакции. При постановке мультиплексной ПЦР c ДНК штаммов различных видов установлено, что олигонуклеотидные затравки, разработанные для амплификации представителей видов B. abortus и B. Melitensis, обладают 100%-ной специфичностью. В свою очередь, сконструированные для детекции основного возбудителя бруцеллеза собак (B. canis) праймеры также пригодны для выявления бактерий B. suis. Таким образом, разработанные праймеры и TagMan-зонды могут быть включены в состав ПЦР-РВ диагностикума, пригодного не только для индикации основного вида возбудителя бруцеллеза собак – B. canis, но и «нетипичных» для данных животных видов B. suis, B. abortus и B. melitensis.